产品货号：
BTN131005
中文名称：
cDNA第二链合成试剂盒
英文名称：
Second Strand cDNA Synthesis Kit
产品规格：
10T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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cDNA第二链合成试剂盒的起始材料是已经完成第一链cDNA合成的RNA-DNA杂交链。
用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其示意图如下：
保存：-20℃，有效期1年。
一、合成cDNA第一条链
本试剂盒不提供cDNA第一链合成试剂，用户需自备相关试剂合成cDNA第一链。
二、合成cDNA第二链
相关搜索：cDNA第二链合成试剂盒，Second Strand cDNA Synthesis Kit
用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其示意图如下：
- 即开即用，含有合成cDNA第二链的所有试剂，包括RNase H、E.coli DNA聚合酶I和DNA连接酶。
- 一管式操作，不需要每次进行纯化，不丢失宝贵的样品。
- 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
- 本试剂盒足够10次80μL体系的cDNA第二链合成反应。
| 组分 | 规格 |
| 5×cDNA第二链合成缓冲液 | 160μL |
| 20×cDNA第二链合成酶混合液 | 40μL |
| 0.2M EDTA溶液 | 60μL |
| 超纯水 | 1mL |
保存：-20℃，有效期1年。
一、合成cDNA第一条链
本试剂盒不提供cDNA第一链合成试剂，用户需自备相关试剂合成cDNA第一链。
二、合成cDNA第二链
- 在冰浴上向10μL已经完成cDNA第一条链合成的反应体系（逆转录体系）中依次加入下表试剂，如果多于10μL，请只取用10μL。
注：克隆双链cDNA一般需要平末端化，需要T4 DNA聚合酶处理步骤。PCR、SSH等后续处理一般不需要把双链cDNA平末端化，则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤，直接用EDTA终止反应。成分 用量 cDNA第一链合成产物 10μL 超纯水 48μL cDNA第二链合成缓冲液 16μL cDNA第二链合成酶混合液 4μL 共80μL，轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时 自备的T4 DNA聚合酶（见注） 1μL 轻柔吹打混匀后，16℃继续保温30分钟 0.2M EDTA溶液 2μL - 终止反应：如果后续实验(如电泳)不担心EDTA的影响，可以直接加入4μL 0.2M EDTA溶液终止反应，然后将样品放-20℃长期保存。如果后续实验（如PCR扩增）不担心cDNA的单双链状态，可以95℃保温10分钟终止反应。如果后续实验既受EDTA影响，又不能是单链DNA，则可以用PCR过柱纯化法纯化。
- 电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5～10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
- 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交（SSH）等实验。
相关搜索：cDNA第二链合成试剂盒，Second Strand cDNA Synthesis Kit